مطالعه اثر اسید آمینه متیونین بر بیان ژن بتا 1 و 3 گلوکاناز و فعالیت آنزیم‌های مؤثر در القای مقاومت به بیماری شانکر مرکبات در لیموترش

نویسندگان

چکیده

شانکر باکتریایی مرکبات با عامل Xanthomonas citri subsp. citri، یکی از مهم‌ترین بیماری‌های مرکبات در مناطق گرمسیر و نیمه گرمسیر محسوب می‌شود. تجمع پروتئین‌های مرتبط با بیماری‌زایی مانند بتا 1و 3 گلوکاناز در اثر حمله عوامل بیمارگر گیاهی، از جمله مکانیسم‌های دفاعی گیاهان علیه عوامل بیماری‌زا به شمار می‌رود. به منظور بررسی بیان ژن PR-2 مرتبط با آنزیم بتا 1و 3 گلوکاناز و نیز فعالیت آنزیم‌های مؤثر در القای مقاومت به بیماری شانکر مرکبات، آزمایشی در قالب طرح کاملاً تصادفی انجام شد. در این مطالعه از اسید آمینه متیونین در غلظت 25 میلی مولار و آب مقطر به عنوان کنترل استفاده گردید. گیاهان تیمار شده، پس از 48 ساعت با 5 میکرولیتر از سوسپانسیون باکتری (با غلظت 108 پرگنه در میلی‌لیتر) به روش تلقیح توسط سرنگ بدون سوزن مایه‌زنی شده و تحت شرایط گلخانه‌ای قرار گرفتند. بر اساس نتایج آزمایش فنوتیپی، بین گیاهان تیمار شده با اسید آمینه متیونین و گیاهان شاهد تیمار شده با آب مقطر سترون، اختلاف معنی‌داری در سطح احتمال 05/0 وجود داشت. همچنین نتایج آزمون مولکولی نشان دهنده افزایش بیان ژن PR-2 در 24، 48 و 72 ساعت بعد از مایه‌زنی در گیاهان تیمار شده بود. بر اساس نتایج حاصل از بررسی آنزیم‌های آنتی‌اکسیدان در گیاهان تحت تنش، تیمار گیاهان با اسید آمینه متیونین به طور معنی‌داری سبب افزایش فعالیت آنزیم‌های پراکسیداز و فنیل آلانین آمونیولیاز گردید در حالی که در میزان فعالیت آنزیم کاتالاز تأثیر چندانی نداشت. 

کلیدواژه‌ها


عنوان مقاله [English]

The effect of amino acid Methionine on β- 1,3 glucanase gene expression and activity of effective enzymes in induced resistance to citrus canker disease in lime

نویسندگان [English]

  • Vahideh Hasabi
  • Hossein Askari
  • Seyed Mehdi Alavi
  • Masood Soltani Najafabadi
  • Hamidreza Zamanizadeh
چکیده [English]

Citrus bacterial canker, caused by Xanthomonas citri subsp. citri, is one of the most important diseases of citrus in tropical and subtropical regions. Accumulation of pathogenesis-related proteins such as β -1, 3 glucanase against plant pathogen attack, as plant defense mechanisms against plant pathogens is considered. To investigate the expression of PR-2 genes related β -1, 3 glucanase and the effective enzymes in induced resistance to citrus canker, an experiment was conducted in a completely randomized design. The amino acid methionine at a concentration of 25 mM and distilled water as control, were used for this study. After 48 hours post treatment, plants were inoculated with 5 ml of bacterial suspension (at a concentration of 108 colonies per ml) by syringe without needle and contained under greenhouse conditions. Based on phenotypic tests results, there were significant difference in the level of 0.05 between the amino acid methionine treated plants and control plants treated with sterile distilled water. The molecular test results indicated an increase in the expression of PR-2 at 24, 48 and 72 h after inoculation. Based on the results of antioxidant enzymes activity study in stressed plants, plants treated with the amino acid methionine significantly increased the enzyme activity of peroxidase and phenylalanine, however, did not affect on catalase activity.

کلیدواژه‌ها [English]

  • Bacterial citrus canker disease
  • Induced resistance
  • β -1
  • 3 glucanase
  • Xanthomonas citri subsp. citri
Agrios, G.N. 2005. Plant Pathology (5th ed.). Elsevier Academic Press.

Ballester, A.R., Lafuente, M.T.& González-Candelas, L. 2006. Spatial study of antioxidant enzymes, peroxidase and phenylalanine ammonia-lyase in the citrus fruit-Penicillium digitatum interaction. Postharvest Biology and Technology, 39, 115-124

Bradford, M. M. 1976. A rapid and sensitive method for quantitation of microgram quantities of protein utilizing the principle of protein-dye binding. Analytical Biochemistry, 72: 248- 254.

Cohen, Y., Gisi, U. & Mosinger, E. 1991. systemic resistance of potato plants against Phytophthora infestans induced by unsaturated fatty acids. Physiological and Molecular Plant Pathology. 38(4): 225-263.

Dhindsa, R.S., Dhindsa, P.& Thorpe, A.T. 1981. Leaf senescence correlated with increased levels of membrane permeability and lipid peroxidation and decrease levels of superoxide dismutase and catalase. Journal of Experimental Botany, 32: 93-101.

Distefano, G. La., Malfa, S., Vitale, A., Lorito, M., Deng, Z. & Gentile, A. 2008. Defencerelated gene expression in transgenic lemon plants producing an antimicrobial Trichoderma harzianum endochitinase during fungal infection. Transgenic Research. 17 : 873-879.

Dixon, R.A., Harrison, M.J.& Lamb, C.J. 1994. Early events in the activation of plant defense responses. Annu. Rev. Phytopathology, 32: 479-501.

Dong, H. & Beer, S. V. 2000. Riboflavin induces disease resistance in plant by activating a novel signal transducation pathway. Phytopathology, 90: 801- 811.

Francis, M.I., Redondo, A., Burns, J. K. & Graham, J H. 2009. Soil application of imidacloprid and related SAR inducing compounds produces effective and persistent control of citrus canker. European Journal of Plant Pathology, 124:283-292.

Gapinska, M., Sklodowska, M. & Gabara, B. 2008. Effect of short- and long-term salinity on the activities of antioxidative enzymes and lipid peroxidation in tomato roots. Acta Physiologiae Plantarum, 30:11-18.

Gottwald, T. R.& Graham, J. H. 2000. Canker pp. 5-7, In: Timmer L.W., Garnsey S.M., Graham J.H. (eds.) Compendium of citrus diseases, 2nd edn. APS Press, St. Paul. 5–7.

Graham, J. H. & Leite R P. 2004. Lack of control of citrus canker by induced systemic resistance compounds. Plant Disease, 88:745-750.

Graham, J. H. & Leite, R P, Jr. 2007. Soil-applied neonicotinoids for control of bacterial diseases on young citrus trees. Proceedings of International Workshop PR-Proteins and Induced Resistance Against Pathogens and Insects. Doorn, The Netherlands.

Graham, J.H. & Myers, M.E. 2011. Soil Application of SAR Inducers Imidacloprid, Thiamethoxam, and Acibenzolar-S-Methyl for Citrus Canker Control in Young Grapefruit Trees. Plant Disease, 95(6): 725-728.

Heil, M. & Bostock, R.M. 2002. Induced systemic resistance (ISR) against pathogens in the context of induced plant defences. Annal Botany, 89: 503-512.

Herman, M. A. B., Restrepo1, S. & Smart, C. D. 2007. Defense gene expression patterns of three SAR-induced tomato cultivars in the field. Physiol. Mololcular Plant Pathology. 71:192-200.

Kuc, J., Barnes, E., Daftsios, A. & Williams, E. B. 1959. The effect of amino acids on susceptibility of apple varieties to scab. Phytopathology, 49:313-315.

Kuc, J., Williams, E. B. & Shay, J. R. 1957. Increase of resistance to apple scab following injection of host with phenylthiourea and Dphenylalanine. (Abstr.) Phytopathology. 47:21-22.

Reuveni, R. 1995. Biochemical marker of disease resistance. pp. 99-114, In R.P. Singh. and U.S. Singh (eds). Molecular Methods in Plant Pathology. Boca Raton, Florida, USA: CRC Press.

Rinaldi, D.A.& Leite, J.r. R.P. 2000. Adaptation of Xanthomonas axonopodis pv. citri population to the presence of copper compounds in nature. Proceeding International Society of Citriculturs,. 2: p. 1064.

Schaad, N.W., Postnikova, E., Lacy, G.A, Sechler & Garkova, L. 2006. Emended classification of xanthomonad pathogens on citrus. Systematic and Applied Microbiology, 29: 90-695.

Van Andel, O. M. 1958. Investigations on plant chemotherapy II. Influence of amino acids on the relation plant-pathogen. Tijdschr. Planteziekten, 64:307-327.